Kako postati komuna shizophyllum: ustvarite sterilno kulturo iz najdenih gob: 3 koraki (s slikami)

2024 Avtor: John Day | [email protected]. Nazadnje spremenjeno: 2024-01-30 12:07

Ta pouk je osredotočen na razlago, kako ustvariti sterilno kulturo gobaste komune Schizophyllum (splošno ime goba Split Gill) na petrijevki z uporabo najdenih gob. Ugotovljeno je bilo, da ima občina Schizophyllum več kot 28 000 spolov, najdemo jo na vseh celinah, razen na Antarktiki, in ima sposobnost (tako kot druge "glive bele in rjave gnilobe") razgraditi onesnaževanje endokrinih motenj (plastika, posnemanje hormonov v industrijski petrokemiji, npr. gnojilo Atrazin, mehčalec bisfenol-A ali sintetični hormon dietilstilbestrol).

Preučil bom tehnike identifikacije divjih gob, kako narediti petrijevko iz hranilnega agarja in kako uporabiti najdene gobe za gojenje sterilne izolirane kulture v petrijevki. Drugi navodili v tej seriji obravnavajo tehnike, kot so genska identifikacija gob, preprosti encimski testi za preverjanje sposobnosti gob, da razgradijo plastiko in onesnaževanje hormonov, ter kako narediti sir s S. Commune.

Ta projekt je nastal iz sodelovanja Mary Maggic, Paula Pin in mene med bivanjem v HANGAR -u v Barceloni, Španija, jesen, september 2018. Za več informacij o projektu preberite na ~~ ali preskočite vse Bla Bla in pojdite naravnost na Step 1 za vadnico:)

Slike so iz Fanzine Schizophyllum Commune ~ datoteke lahko brezplačno prenesete tukaj

Med rezidenco so bili naši trije glavni cilji:

1 ~ Raziščite in preučite znanstveno literaturo o Schizophyllum Commune in njenih različnih interakcijah s hormoni in endokrinimi motilci petrokemičnih onesnaževal. S. Commune je ena izmed mnogih gliv "bele in rjave gnilobe", ki lahko razgrajujejo hormonsko in endokrino moteče onesnaženje. Te glive se hranijo z dreves z izločanjem "lignoceluloznih" encimov iz njihovih mrežnih teles ali "micelija", encimi pa lahko razgradijo celulozo in lignin, iz katerega so drevesa. Zaradi strukturnih podobnosti med celulozo, ligninom in hormoni EDS, kot so atrazin, BPA, estradiol, dietilstilbestrol in nenilfenoli, lahko "lignocelulozni" encimi, ki jih izločajo glive, razgradijo tudi številne strupene snovi. Poleg tega S. Commune proizvaja imunostimulirajoče polisaharide, ki so v pomoč pri preprečevanju in zdravljenju raka (odobreno na Japonskem za zdravljenje raka materničnega vratu), lahko s fermentacijo povečajo fitoestrogene lastnosti nekaterih rastlin, ki se lahko uporabljajo namesto sirišča in laktobacilija pri postopki izdelave sira in proizvajajo encime za raztapljanje trombinskih strdkov (uporabno pri zdravljenju tromboze). Čudno je, da te iste "beta-glukane", ki jih je mogoče ekstrahirati z vrelo vodo kot zdravljenje raka in imunostimulantov, uporablja tudi naftna industrija za povečanje donosa olja, s čimer S. Commune poveže v bizaarno povratno zanko s proizvodnjo endokrinih motilcev. petrokemikalije se lahko razgradi in sanira.

2 ~ Razviti protokole DIY in DIWO (naredi to z drugimi), ki poenostavljajo te recepte pri delu z EDC in glivami za prevajanje kodificiranega znanstvenega znanja v jezik, ki je bolj dostopen. Uporabite te recepte za izobraževanje, spraševanje, odpor do molekularnih kolonizacij in ustvarjanje novih pripovedi o nastajanju več vrst in naši kolektivni mutagenezi.

3 ~ Izzvati prevladujoč cisheteronormativen, queerphobic diskurz, ki obdaja kemikalije, ki motijo endokrine sisteme (EDC). Če citiram štipendijo Malin Ah-King in Eve Hayward o tem vprašanju: "Številne novice poročajo o teh zastrašujočih endokrinih zgodbah z naših dvorišč. V prizadevanju, da bi ta vprašanja-kot jih bomo opisali v nadaljevanju-mediji osvetlili Frankensteinovo metamorfozo ki ogroža spol in spolnost. Namesto da bi obravnavali številna druga zdravstvena tveganja, povezana s izpostavljenostjo toksičnim snovem, so najbolj senzacionalna in polemična vprašanja predmet razprave in kritičnega odziva. Odpira se vprašanje: Zakaj je spol bolj osrednji kot rak, avtoimunska bolezen, in celo smrt? Kateri kulturni živci (od katerih so številni globalizirani) se sprožijo? In za tiste, ki imamo feministične skrbi, kako razpravo preusmeriti stran od esencializma, seksizma in heteronormativnosti? " (Strupeni spoli).

Schizophyllum Commune je edinstvena gliva bele gnilobe, saj je bilo ugotovljeno, da ima več kot 28 000 genetskih spolov. Ta prilagoditev, ki jo mnogi teoretizirajo, je omogočila neverjetno genetsko raznolikost te vrste, ki obstaja na vseh celinah po svetu, razen na Antarktiki. Želeli smo proslaviti lepo spolno raznolikost tega organizma kot en primer čudaštva biologije. Prevladujoči diskurz, ki obkroža EDC v medijih in celo od okoljskih aktivistov, se močno osredotoča na neznanstvene pripovedi, da te molekule povzročajo določene spolnosti ali spole, ki jih naša družba patologira, označuje za nenormativne in se jim pogosto poskuša odpraviti ali se jim izogniti. Ne samo, da je spolno paničen, queer-fobičen fokus javnega negodovanja glede znanstveno nerealnega EDC (hormoni in endokrini motilci ne delajo ljudi čudnih ali trans), ampak zanemarja vse uničujoče resnične učinke, ki jih lahko povežemo z EDC: debelost, motnje ščitnice, nekatere vrste raka, med drugimi zdravstvenimi tveganji.

1. korak: Poiščite komuno shizophyllum, ki živi v vaši skupnosti

Sterilne kulture laboratorija razreda Schizophyllum Commune je mogoče kupiti za približno 350 USD pri mikrobiološki banki za kulturo, kot je ATCC … zato smo se za kulturo iz divjih gob odločili brezplačno:)

Bilo mi je lahko, ker sem brala o komuni shizophyllum in slučajno sem opazila, da nekega dne raste na drevesu pred mojim stanovanjem. Če nimate te sreče, da bi slučajno naleteli na S. Commune v vaši soseščini, se boste odpravili na gozdnato območje, da bi poiskali gobe "oklepaj", ki rastejo na bolno trdem lesu (drevesa, ki izgledajo kot da ne delajo preveč dobro) ali podrta drevesa. S. Commune je ena najpogostejših obstoječih gliv po vsem svetu in jo v osnovi lahko najdemo povsod, kjer raste trden les.

Mushroomobserver.org ponuja odličen podroben opis, kje in kdaj boste verjetno našli S. Commune, pa tudi, kako ga prepoznati in kako se izogniti "podobnosti", ki bi lahko privedla do napačne identifikacije:

"IDENTIFIKACIJA: Komuno shizophyllum zlahka prepoznamo po razcepljenih škrgah, gostih dlakah in čepu v obliki ventilatorja. Klobuk je širok 1-4,5 cm in običajno ima obliko lupine ali ventilatorja s sivo do belkasto površino. Bazidiospore so 5-7,5 × 2 -3 mikrometrov Podobna goba, znana kot "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa, ni tako razširjena.

NASTAJANJE: Komuna Schizophyllum raste na trdem lesu z uporabo encimov za razgradnjo lignina in povzroča "belo gnilobo". Tako ga najdemo na skoraj vseh gozdnatih območjih. Najdemo ga skozi vse leto zaradi svoje sposobnosti, da se izsuši, v boljših pogojih rehidrira in nato še naprej trosi.

Ta gliva je lahko parazitska na drevesih majhnih premerov, ki so pod stresom zaradi drugih dejavnikov, na primer suše.

POGLEDAJTE PODOBNO: Plicaturopsis crispa ali "stisnjena škrga" je podobna splitski škrgi. Ima tudi plod v obliki lupine/ventilatorja. Vendar je pokrovček rdečkasto rjave ali rumeno rjave barve, spodnja stran pa je zelo izrazita. Ima stisnjene žile, podobne škrgam, ki so precej drugačne od razcepljenih škrg v občini Schizophyllum. Obložena škrga je manj pogosta, vendar značilna, ko jo najdemo."

2. korak: Naredite hranilne agarske plošče za S. Commune, da bodo rasle

Če želite izolirati kulturo S. Commune, boste našli nekaj petrijevk, napolnjenih s hrano za gobo. Sladni ekstrakt Agar je preprosta hrana za S. Commune ali "hranilni medij", ki ga lahko pripravimo iz lahko dostopnih sestavin. Prav tako je dober vir hrane za uporabo pri poskusih encimskih testov s S. Commune in drugimi glivami bele ali rjave gnilobe ~~ ta postopek bo opisan v drugem navodilu.

STRANSKA OPOMBA: Če ste imeli težave pri iskanju S. Commune, obstaja veliko drugih gliv v isti družini, ki jih lahko gojimo z istimi postopki in so prav tako dobre, če ne celo boljše pri razgradnji onesnaževal, ki motijo endokrine sisteme. Puranjski rep (Trametes Versicolor) je bil v številnih študijah ugotovljen, da je na stotine gliv bele in rjave gnilobe največjih proizvajalcev "lignoceluloznih" encimov, ki razgrajujejo petrokemično onesnaženje. Ostrige so pri tem tudi zelo dobre.

Svoje mikrobiološko delo opravljam v biološkem laboratoriju skupnosti, imenovanem BUGSS (Baltimorski podzemni znanstveni prostor), kjer imam dostop do steklovine, digitalnih tehtnic, graduiranih cilindrov, avtoklava (za toplotno in tlačno sterilizacijo medijev) itd. se je pojavil po vsem svetu v zadnjem desetletju, zato bi morda želeli preveriti ta seznam, če je v vaši bližini. Če na vašem območju nimate takega skupnega laboratorija, boste morali za ta proces vložiti nekaj osnovne opreme, na primer:

1 ~ Digitalna lestvica za natančno merjenje sestavin

2 ~ Lonec na pritisk za sterilizacijo medijev s toploto in paro

3 ~ Petrijeve posode, ki jih je mogoče kupiti na spletu precej poceni, steklo za večkratno uporabo ali plastika za enkratno uporabo bo delovalo, vendar je večkratna uporaba vedno boljša:)

4 ~ Nekaj steklene posode za mešanje sestavin, sterilizacijo in shranjevanje.

Če ne želite vlagati v to opremo, lahko na agregatnih ploščah, ki so napolnjene z ekstraktom slada, kupite predhodno napolnjene agarske plošče ~ dolgoročno bo le dražje, če nameravate še naprej opravljati mikrobiološka dela.

Obstaja že veliko odličnih vodnikov in videoposnetkov na youtube o tem, kako doma narediti petrijevke iz hranilnih medijev. Namesto da bi se podrobneje o tem pogovarjal, bom povezal le nekaj - in podal recept za 2% sladni ekstrakt agarja, ki je hranilni medij, ki ga boste uporabljali.

Sveže gobe: vodnik o tem, kako narediti plošče iz agarja za gojenje gob doma

Mykoweb: Začetek gojenja gob

Tehnični list sladnega ekstrakta agarja

2% sladnega ekstrakta slada (MEA) ~~ Recept za 1 liter:

20 g ekstrakta slada (običajna dobava piva, ki jo je mogoče kupiti na spletu)

15 g agarja (sredstvo za strjevanje - to se pogosto uporablja za kuhanje, zato ga je mogoče kupiti na spletu ali v nekaterih trgovinah z živili)

1 liter H20 (običajno uporabljam vodo za povratno osmozo, ki jo je mogoče kupiti v večini trgovin z živili v galonskih vrčih)

Ta recept lahko preprosto spremenite, če želite narediti manjše količine. Pogosto na primer pripravim le 250 ml naenkrat, zato na koncu uporabim le 5 gramov sladnega ekstrakta, 3,75 grama agarja in 250 ml vode.

3. korak: Petrijevo posodo napolnite z glivicami

Goba, ki jo vidite, se imenuje "plodovnica", je le majhen del telesa. Večina njegovega telesa je skrita v drevesu (ali v tleh) in porabi les. Ta del gobe se imenuje micelij. Za gojenje belega nitastega, lovnega, rizomatskega, micelijskega telesa Schizophyllum Commune na petrijevko, boste vzeli vzorec stebla, ga sterilizirali in položili na plošče MEA. Micelij bo zrasel iz vzorca jedra stebla gob in koloniziral petrijevko, videti kot bela bombažna preproga.

Potrebovali boste:

• Agar ekstrakt slada (MEA), ki ste ga pripravili v prejšnjem koraku
• 70% izopropil alkohola (alkohol za drgnjenje) in razpršilna steklenica
• Papirnate brisače
• Skalpel ali samo britvica iz nerjavečega jekla bo delovala
• kovinska pinceta
• rokavice
• Plamen - za sterilizacijo inštrumentov uporabljam alkoholno svetilko, NonDisjunction ima odlično vadnico, kako to narediti tukaj.
• Sterilna površina za rezanje (za to sem ravnokar uporabila sterilno petrijevko)
• Parafilm, parafinski film, ki se uporablja za tesnjenje petrijevk - lahko uporabite tudi samolepilni trak, če tega nimate

STERILNA TEHNIKA:

Pri poskusu uporabe sterilne tehnike si morate zapomniti, da bakterije in spore nenehno padajo v zrak, zato želite svoje petrijevke čim bolj pokriti. Ko dvignete pokrove, da vlijete medij, ali cepite, je vedno najbolje, da pokrov držite tik nad posodo, kar vam omogoča vodoravni dostop do notranjosti, pokrov pa držite nad posodo, da preprečite vdor bakterij. Drugič, so velikanski konglomerat človeških, bakterijskih, glivičnih in drugih organizmov ~~ čeprav tega ne vidite, vas obdaja gost oblak mikrobov, ki se razpršijo po telesu. Namesto da bi samo sedel na površini vaše kože, se vaš mikrobiom razteza v zrak ~ ~ takooooooo, nikoli ne mahajte z rokami nad petrijevko ali se nagnite nad odprto posodo, da jo pogledate. Če nosite rokavice, jih imaš;)

NASTAVITE SVOJ POLSTERILNI DELOVNI PROSTOR

Izberite neporozno delovno površino brez smeti in smeti. Območje razpršite s 70% raztopino izopropilnega alkohola in ga obrišite s papirnato brisačo. Plamen postavite na sredino delovnega območja in ga prižgite. Delati boste morali čim bližje plamenu, ker ustvarja majhno sterilno polje okoli njega. Plošče MEA postavite na eno stran, vzorec gob pa na sterilno rezalno površino na drugi strani. Običajno uporabljam sterilno petrijevko kot sterilno rezalno površino in kot nosilec za orodje. V majhen kozarec nalijte nekaj izopropilnega alkohola - to boste uporabili za sterilizacijo rezila in pincete med delom.

*¡~ INOCULATE ~!*

Preden kaj storite, sterilizirajte rezilo in pinceto, tako da jih potopite v izopropilno alko in jih nato nekaj časa držite nad plamenom. Po sterilizaciji jih položite na sterilno rezalno površino, če jih odložite. S pinceto držite gobino steblo pri miru in mu odrežite kos. Vzemite ta kos in prerežite vse stranice, tako da boste na koncu dobili majhno kocko jedra stebla gob z odstranjenimi vsemi zunanjimi površinami. To pomaga odstraniti vse druge mikrobe, ki živijo na gobah, da ne onesnažijo vaše kulture. Nato jedro stebla potopite v izopropil za približno 30 sekund, ga izvlecite in pustite, da se posuši v sterilnem polju plamena (plamena ne uporabljajte za sušenje, saj bo to uničilo gobo). Ponovno sterilizirajte pinceto, medtem ko počakate, da se jedro stebla posuši. Nato preprosto dvignite pokrov ene od vaših plošč MEA toliko, da pinceto potisnete od strani, in s sterilizirano pinceto postavite jedro stebla na sredino plošče. Ploščo zapečatite s parafilmom in v naslednjih nekaj tednih bi morali videti, da S. Commune micelij kolonizira ploščo.

Pri delu z divjimi vzorci ponavadi naredim več plošč, tako da bom, če pride do kontaminacije, bolj verjetno vsaj eno čisto kulturo.